高效液相色譜具有高壓、高效、高速、高靈敏度、高選擇性等特點,廣泛應用于醫藥、環保、石化、食品、化工等行業,是現在分離分析的重要方法,本文著重介紹HPLC的工作原理、基本組成及高效液相色譜名詞術語,使新學者快速了解高效液相色譜知識,在日常操作中理論與實踐結合,確保HPLC的高效運行、快速分析。
高效液相色譜由溶劑輸送系統(脫氣機、高壓泵等)、進樣系統(定量泵、六通閥、定量環、進樣針等)、分離系統(色譜柱等)、檢測系統(檢測器等)、記錄及數據處理系統。
高壓輸液泵:將流動相在高壓下連續不斷地送入液路系統,具有有足夠的壓力,輸出流量恒定、可調,輸出壓力平穩,泵室體積小,泵體抗腐蝕、耐酸等特點。
在線脫氣機:四元低壓系統屬于泵前混合,由于在常壓下混合,極易產生氣泡,必須配有在線脫氣機,并要求流動相使用前進行脫氣。
進樣系統:分為手動進樣系統和自動進樣系統, 主要由定量環、六通閥、進樣針等部件組成。手動進樣系統的定量環用于準確定量,分為5μl、10μl、20μl等,需要根據不同進樣量選擇合適的定量環;自動進樣系統儀器自帶定量環多為100μl,如進樣量大于定量環體積需咨詢相應儀器工程師更換定量環及計量泵等,六通閥是理想的進樣部件,由圓形密封墊(轉子)和固定底座(定子)組成,通過閥切換保證恒定的流速。
分離系統:包括色譜注、柱溫箱,連接管線等部件。
色譜柱一般用內部拋光的不銹鋼制成。其內徑為2~6mm,柱長為10~50cm,柱形多為直形,內部充滿3~10 μm高效微粒固定相,根據不同的實驗需求需要選擇不同填料、不同規格的色譜柱。
柱溫箱:保證分離系統的溫度恒定,降低溫度波動對色譜基線、保留時間及色譜分離的影響,包括普通柱溫箱及帶有冷卻功能的柱溫箱,普通柱溫箱可以根據方法需求設定高于室溫的溫度(一般應高于室溫5℃以上),降低柱壓或是改善色譜分離。
以上就是高效液相色譜結構的一些介紹,供大家參考!