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微量血鋅正常參考值及火焰原子吸收法測定

更新時間:2012-11-04    點擊次數:4111

 

   在我國鋅缺乏現象相當普遍。血清鋅濃度測定是當前*的鋅缺乏診斷試驗。如果能夠排除感染、發燒、創傷等應激反應,血清鋅測定值可以反映體內鋅總體水平。但這種方法用血量較多,兒童及其家長不愿接受。頭發鋅含量測定曾作為診斷鋅缺乏的常用方法。頭發樣品的采集、運送、貯存、檢測都較方便,易為兒童及其家長所接受。但洪昭毅等曾同時測定467例小兒血清和頭發鋅含量,結果顯示二者無相關性。頭發鋅含量測定只能作為群體營養狀況及環境污染的監測指標,不能作為鋅缺乏的診斷指標。近年來,有學者相繼探索微量、簡易、快捷、靈敏、可靠的鋅缺乏診斷方法。本室將有關報道加以綜合、改進,建立了高靈敏微量進樣火焰原子吸收法測定微量全血鋅的方法,并應用該方法進行中國公共衛生專項調查,以期制訂正常參考值?,F報告如下。
    1
 對象與方法
    1.1
 對象 江西醫學院護理系一年級120名女生,平均年齡18.6 ,zui小年齡17(16) ,zui大年齡21(2 。采血時皆無感染發燒等急性病表現,亦無嚴重慢性疾病。
    1.2
 方法 
    1.2.1
 靜脈血采集 于早晨空腹時采集,血樣離心分離血清,置冰箱備測。
    1.2.2
 全血樣采集 于采靜脈血的同時,用一次性毛細管取同一人指端未稍血20μl注入盛有1ml稀釋液的聚乙烯塑料管中,并將附于毛細管壁的血洗凈,加蓋封緊置冰箱備測。
    1.2.3
 稀釋液及標準液配制 配制0.1 %TritonX-100水溶液,用于稀釋血樣,并起增敏和抗干擾作用。用純ZnO配制濃度為1000mg/LZn標準儲備液0.1mol/ LHNO3) ,放于冰箱備用。測試前用0.05 %TritonX-100 逐級稀釋配制標準工作液。
    1.2.4
 儀器測定條件 (1) 血清鋅測定:所用儀器為原子吸收分光光度計, 采用火焰法。波長213.8 nm ,燈電流7mA ,狹縫1nm ,燃燒器高度7mm ,空氣流量6.0L/ min ,乙炔流量1.0L/ min(2) 微量全血鋅測定:設備條件同上。
    1.2.5
 測定方法 (1) 血清鋅測定:取靜脈血離心分離血清。取血清1ml0.1mol/ L HNO34 ml混勻。將儀器按1.2.4 (1)所述條件設定調試好。用重蒸餾水調零。將空白液及系列標準液依次噴入火焰,記錄吸光度,繪制標準曲線。再將樣品噴入火焰,記錄吸光度,從標準曲線上查得待測樣品的濃度。
    (2)
微量全血鋅測定:向盛有全血的聚乙烯管中加入測試稀釋液1 ml ,搖勻上機測試。即按選定的儀器測定參數,分別將標準溶液和試樣溶液直接噴霧測定吸光度。標準溶液標準工作液系列濃度為:0 ,50 ,100 ,150 ,200μg/ L 。曲線繪制及結果計算由儀器配套計算機自動完成。
    1.2.6
 確定正常參考值的方法 在比較均數加減標準差法與百分位數法的基礎上,從診斷實際出發制訂正常參考值。
    2
 結 果
    2.1
 血清鋅及全血鋅測量值 樣本量為120例。血清鋅均數為11.9μmol/ L ,標準差為3.49 ,中位數為11.50 。全血鋅均數為66.54μmol/ L ,標準差為8.52 ,中位數為67.60μmol/L 。第5 百分位血清鋅值為7.36μmol/ L , 30 百分位數為9.50 ; 40 百分位數為10.42 ; 5 百分位全血鋅值為50.48μmol/ L ,30 百分位數為62.48 ;40 百分位為64.94 。
    2.2
 分布檢驗 血清鋅測量值呈正偏態尖峭峰分布。全血鋅測量值呈負偏態尖峭峰分布。
    2.3
 火焰原子吸收光譜法測定微量全血鋅的靈敏度與特異度 以火焰原子吸收光譜法所得血清鋅測定值作為金標準”,即血清鋅測定法判斷為陽性者屬于真陽性病人評價火焰原子吸收光譜法測定微量全血鋅簡稱微量全血鋅測定法的靈敏度與特異度。當血清鋅測定法陽性鋅缺乏判斷標準為9.50μmol/ L ,微量全血鋅測定法陽性鋅缺乏判斷標準為62.50μmol/L, 后者的靈敏度為82.05% ,特異度為87.65 %。當血清鋅測定法陽性判斷標準為10.10μmol/ L ,微量全血鋅測定法陽性判斷標準為64.30μmol/ L,后者的靈敏度為92.50 % , 特異度為87.5 % , 假陰性率漏診率7.5 % ,假陽性率誤診率12.5%。當血清鋅測定法陽性判斷標準為10.42μmol/ L ,微量全血鋅測定法陽性判斷標準為64.94μmol/ L,后者的靈敏度降為87.8 % ,特異度降為86.07 %。
    3
 討 論
    
正常參考值的常用表示方法是均數加減標準差法。應用該表示方法的前提是,諸測量數據的頻數分布呈正態。如前所述,微量全血鋅測定法諸測量數據呈偏態分布。此外,應用這種表示方法都假定患病率為5 % ,這與實際情況不符。正常參考值的另一常用表示方法是百分位數法。這種表示方法同樣假定鋅缺乏患病率為5 %。我們應用這一標準在人群中進行鋅缺乏篩選,其結果與臨床表現的符合率很低。所以這兩種方法均不適用于制訂全血鋅的正常參考值。
    
根據文獻資料和實驗,取第30百分位數血清鋅測量值作為陽性分界值即金標準”,評價第30 百分位數微量全血鋅測量值待評價標準的靈敏度和特異度。結果顯示,靈敏度為82.05 % , 特異度為87.65 %。將待評價標準改為64.30μmol/ L , 則靈敏度提高至92.50 %( 漏診率僅為7.50 %) ,特異度( 87.50 %)仍處于較高水平, 誤診率僅12.5 %。若將待評價指標改為第40 百分位數測量值64.94μmol/L ,則靈敏度降至87.80 % ,特異度降至86.07 %。所以,火焰原子吸收光譜法測定微量全血鋅其正常參考值下限應訂為64.30μmol/ L 。
參考文獻
1
顏世銘,洪昭毅,李增禧.實用元素醫學[M].鄭州:河南醫科大學出版社,1992,112.
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閻正,蔣守規. 微量注射進樣火焰原子吸收法測定耳血全血鋅、銅及幼兒正常參考值的獲得[J ] . 光譜學與光譜分析,1993 ,13(2) :71-72.
3
韋國銘. 脈沖進樣原子吸收光譜法直接測定全血中的鐵、鋅、銅[J ] . 廣西預防醫學,1989 ,4 (3) :170 - 171.

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